抗体不要！質量分析によるタンパク質の定量

06/21/2022

No.0608 抗体不要！質量分析によるタンパク質の定量

当社では、安定同位体標識ペプチドを標品としたLC/MS/MSによるタンパク質の定量及び解析を受託している。抗体を用いた定量とは異なるアプローチにより、ELISA用のタンパク質標品等の定量値に対する信頼性が向上し、標準品の規格設定にも利用できる。

本手法の特徴　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　本手法の適用分野・事例

・抗体が不要
・安定同位体標識ペプチド標品の合成も　ワンストップで受託可能
・信頼性基準等のレギュレーションに対応
・高い選択性により、複数種類のタンパク質を網羅的に高感度定量が可能
・複雑なマトリックス試料でも分析可能

・製薬、食品、体外診断薬等の開発
・抗体を使用できないタンパク質の定量
　（変性した試料や類似配列のアイソタイプが多い場合、等）
・目的タンパク質の定量値設定
・特定の翻訳後修飾の定量

MSによる定量分析の流れ

① 定量対象ペプチドの選定
　・試料の前処理
　・ LC/MS/MS (DDA)
　・ペプチド同定計量一覧の出力
　

　　
　前処理、酵素消化
　　　　↓
　LC/MS/MS(DDA)目的タンパク質内のペプチドを網羅的に検出
　　　　↓
　検出強度、配列特異性を考慮し定量に適した配列を選択
　　　　　

　　　　　高性能質量分析計（Thermo Scientific）

② 安定同位体標識ペプチドの設計と合成
　・標識アミノ酸残基の選択
　・アミノ酸組成分析によるペプチド絶対定量
　

　　　　
　＊最適な標識位置を選択し、ペプチド設計・合成
　＊適切な条件でのペプチドの分注・保存
　＊酵素消化効率の評価
　

③ 定量分析
　　・ LC/MS/MS (PRM)
　　　　- 測定条件の最適化
　　　　- 検量線の作成
　

　
　濃度既知の安定同位体標識ペプチドと試料を混合
　　　　　↓
　前処理、酵素消化
　　　　　↓
　LC/MS/MS測定
　PRM（並列反応モニタリング）法
　標品と試料の検出エリアから試料タンパク質の存在量を計算

　　　　　標品ﾍﾟﾌﾟﾁﾄﾞ　　　　試料
　