11/14/2017
No.0337 等温滴定カロリメトリー(ITC)
ITCのアプリケーションと特長
従来の機種よりも高感度 少ない試料量で測定可能
溶液内で可溶性であること ナノ粒子のコロイドは可能 |
・試料の分子量の制限なし
タンパク質-低分子、タンパク質-タンパク質
タンパク質-核酸、金属イオン-タンパク質
ナノ材料-低分子、ナノ材料-タンパク質
・結合様式の推定が可能
特異的結合か非特異的結合かを判別 |
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測定例：カルモジュリン(タンパク質)とメリチン(ペプチド)
Ka （1/M） | ΔG （kJ/mol） | ΔH （kJ/mol） | − TΔS (kJ/mol) |
4.69×107 | -43.78 | 27.41 | -71.2 |
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・Kaの値が大きく、カルモジュリンとメリチンは非常に強く結合
・熱力学的プロファイルから、 ΔS優勢の疎水性相互作用が支配的 |
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| 医薬品開発と熱力学的プロファイルの変遷 |
新しく改良された低分子化合物の薬ほどΔH 優勢で特異的に結合 |
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相互作用解析の各手法の比較
手法 | SPR | STD-NMR | ITC |
原理 | センサー表面の屈折率変化 | 飽和移動に伴うシグナル強度の変化 | 熱量変化 |
試料の前処理 | センサーチップへの固定化 | なし | なし |
リガンド分子量 | 高分子が望ましい
（>8000Da） | 低分子量が望ましい
(<500Da) | 制限なし |
測定可能なアフィニティー | mM～nM | mM～ μM (弱い結合） | mM～nM |
必要蛋白質量 | 10 μg 程度 | 1 mg 程度 | 数百 μg 程度 |
得られる情報 | Ka Kon Koff | Ka | Ka n ΔH ΔS
結合様式 |
結合部位情報 | × | ○ | × |
カテゴリー
ライフサイエンス , 医薬
分類
創薬研究支援